故事發(fā)生在昆蟲世界中，蜘蛛擔(dān)任警察維護(hù)秩序。經(jīng)驗(yàn)豐富的偵探孫神探（維森特·希爾配音）在押送宿敵黑寡婦（伊恩·巴切洛配音）前往舊金山接受審判的航班上，遭遇神秘謀殺案。死者體內(nèi)的特殊毒液顯示此案關(guān)聯(lián)著跨越人蟲兩界的龐大陰謀，而黑寡婦在飛行途中離奇失蹤更令案情復(fù)雜化。隨著調(diào)查深入，孫神探發(fā)現(xiàn)有人企圖利用生物武器引發(fā)跨物種戰(zhàn)爭(zhēng)，在搭檔伊戈?duì)枺ㄥX信伊配音）與昆蟲專家艾米莉博士的協(xié)助下，他必須搶在時(shí)限內(nèi)破解毒液來(lái)源。當(dāng)真相揭露黑寡婦實(shí)為被迫參與陰謀的受害者時(shí)，孫神探選擇與其合作，在飛機(jī)墜毀前的關(guān)鍵時(shí)刻成功摧毀生物武器實(shí)驗(yàn)室。這場(chǎng)危機(jī)最終促成人蟲兩界建立正式協(xié)作機(jī)制，而孫神探也兌現(xiàn)承諾讓黑寡婦獲得新生機(jī)會(huì)。